5-5. 組換えDNAからのRNA調製
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DNA
を
RNA合成
(=
転写
)の鋳型に用いる操作
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ベクター
に組み込まれた
インサートDNA
を
転写
して試験管内で
RNA
を作製するために、
ファージ
の
RNAポリメラーゼ
のための
プロモーター
配列を組み込んだ
転写ベクター
が種々用意されている
酵素としては
T3 RNAポリメラーゼ
、
T7 RNAポリメラーゼ
、
SP6 RNAポリメラーゼ
(
SP6
は
サルモネラ
の
ファージ
)のいずれかが用いられる
いずれも単一
ポリペプチド
かなり、23塩基対のベクター中にある
ファージプロモーター
を特異的に認識する
転写の終結配列がなくとも、適当な場所を
制限酵素
で切断しておけば、そこで酵素が離脱し(
run-off法
)、強制的に
転写
が停止する